国际口腔医学杂志

国际口腔医学杂志 ›› 2022, Vol. 49 ›› Issue (2): 138-143.doi: 10.7518/gjkq.2022016

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毒蕈碱受体通过Yes相关蛋白信号对口腔鳞状细胞癌生物学行为的实验研究

江涵(),神应强(),陈谦明   

  1. 口腔疾病研究国家重点实验室 国家口腔疾病临床医学研究中心 口腔黏膜病国家临床重点专科 中国医学科学院口腔黏膜癌变与防治创新单元 四川大学华西口腔医院口腔黏膜病科 成都 610041
  • 收稿日期:2021-04-25 修回日期:2021-12-01 出版日期:2022-03-01 发布日期:2022-03-15
  • 通讯作者: 神应强
  • 作者简介:江涵,住院医师,硕士,Email： 2177668395@qq.com
  • 基金资助:
    四川大学华西口腔医学院（华西口腔医院）科研经费资助项目(RCDWJS2020-20)

Experimental study of muscarinic receptors on the biological behavior of oral squamous cell carcinoma through Yes related protein signal

Jiang Han(),Shen Yingqiang(),Chen Qianming   

  1. State Key Laboratory of Oral Diseases & National Clinical Research Center for Oral Diseases & National Key Laboratory of Oral Mucosal Diseases & Innovation Unit of Oral Mucosal Carcinogenesis and Prevention, Chinese Academy of Medical Sciences & Dept. of Oral Medicine, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University, Chengdu 610041, China
  • Received:2021-04-25 Revised:2021-12-01 Online:2022-03-01 Published:2022-03-15
  • Contact: Yingqiang Shen
  • Supported by:
    Research Funding from West China School/Hospital of Stomatology Sichuan University(RCDWJS2020-20)

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摘要：

目的 研究毒蕈碱（m）受体在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中发挥的作用及机制。方法 分析癌症基因图谱（TCGA）数据库,并利用实时定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）荧光定量查询和检测m受体基因在头颈部肿瘤和OSCC细胞中的表达水平,再采用m受体激动剂卡巴胆碱进一步研究其对OSCC细胞增殖和侵袭的影响,最终利用免疫荧光探究激活m受体对OSCC细胞内Yes相关蛋白（YAP）核转位的影响。结果 m受体基因在头颈部肿瘤中有表达差异：在5种OSCC细胞系中HN4和HN12的m3受体基因高表达（P<0.05）。激活m受体具有促进OSCC细胞增殖和侵袭的潜能,促进YAP的核转位可能是m受体的作用机制。结论 m受体在OSCC发生发展中发挥重要作用,靶向m受体可能是未来治疗OSCC的新策略。

关键词: 毒蕈碱受体, 口腔鳞状细胞癌, 卡巴胆碱

Abstract:

Objective This study aims to study the role and mechanism of muscarinic (m) receptors in oral squamous cell carcinoma (OSCC). Methods The study involved a query on The Cancer Gene Atlas (TCGA) database of head and neck cancer and used real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) to detect the expression level of m receptor genes in OSCC cells. The m receptor agonist Carbachol was used to further study the proliferation of OSCC cells. Immunofluorescence was used to explore the influence of activated m receptor on the localization of Yes related protein (YAP) in OSCC cells. Results The expression of m receptor genes was different in HNSC. Specifically, chrm3 was highly expressed in HN4 and HN12 (P<0.05). The activation of m receptor can promote OSCC cell proliferation and invasion. Promoting the nuclear translocation of YAP may be the mechanism of m receptor. Conclusion The m receptors are essential for the occurrence and development of OSCC, and targeting m receptors may be a new strategy for the treatment of OSCC in the future.

Key words: muscarinic receptors, oral squamous cell carcinoma, Carbachol

中图分类号: 

  • R739.8

表 1

m受体基因的引物序列"

基因 正向引物（5’-3’） 反向引物（5’-3’）
chrm1 TGACCGCTACTTCTCCG-TGACT CCAGAGCACAAAGGAAACCA
chrm3 ACCATCCCTCAACTCCA-CCAAGT GGAAAACTGCCTCCATCGTC
chrm5 GAAAGCAGCCCAGACA-CTGA AGCACAACCAACAGCCCAAG
gapdh CCTGTTCGATCAGCCG CGACCAAATCCGTTGACTCC

图1

m受体亚型基因的差异表达及生存分析 A~C：chrm1、chrm3、chrm5基因在HNSC中的差异表达;D~F：chrm1、chrm3、chrm5基因的生存曲线。"

图2

OSCC细胞株中m受体基因的表达水平 A：chrm1表达水平;B：chrm3表达水平;C：chrm5表达水平;****P<0.000 1。"

图3

卡巴胆碱在不同浓度下分别对HN12和HSC4细胞增殖活性及侵袭能力的影响 A：卡巴胆碱对HN12和HSC-4细胞增殖实验结果;B和C：卡巴胆碱对HN12细胞侵袭实验结果（结晶紫染色 × 10）;D和E：卡巴胆碱对HSC4细胞侵袭实验结果（结晶紫染色 × 10）;F：卡巴胆碱对HN12侵袭能力的量化统计图;G：卡巴胆碱对HSC4侵袭能力的量化统计图;**P<0.01。"

图 4

卡巴胆碱对OSCC细胞内YAP核转位的影响 A~C：HN12中YAP的免疫荧光实验结果;D~F：卡巴胆碱处理OSCC细胞后YAP的免疫荧光实验结果;G：卡巴胆碱对OSCC细胞免疫荧光实验的量化统计图;**P<0.01。"

图5

YAP和p-YAP经过卡巴胆碱处理后在OSCC细胞中的表达水平 A：卡巴胆碱理OSCC细胞后YAP的p-YAP的免疫印迹实验结果;B：YAP和p-YAP相对表达量的量化统计图;C：YAP相对表达量的量化统计图;D：p-YAP相对表达量的量化统计图;*P<0.05,**P<0.01。"

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